|
|
@ -8,7 +8,7 @@ ruolo importante nel determinare il corretto funzionamento di cellule, |
|
|
|
tessuti e organismi complessi. |
|
|
|
|
|
|
|
Mentre tradizionalmente la biologia si è occupata di studiare come |
|
|
|
processi cellulari e inter-cellulari fossero regolati dallo scambio |
|
|
|
processi cellulari e intercellulari fossero regolati dallo scambio |
|
|
|
di molecole biologiche, il ruolo degli stimoli meccanici è stato a |
|
|
|
lungo ritenuto marginale nella descrizione di questi processi. |
|
|
|
|
|
|
@ -278,38 +278,35 @@ tra un certo numero di proteine interagenti. |
|
|
|
\label{fig:tj} |
|
|
|
\end{figure} |
|
|
|
|
|
|
|
Diverse proteine attraversano la membrana e dimerizzano |
|
|
|
con le loro omologhe appartenenti alla cellula adiacente, |
|
|
|
tra le quali \emph{claudina}, \emph{occludina} e diverse |
|
|
|
proteine appartenenti alla classe delle \textit{junctional |
|
|
|
adhesion molecules}, (JAM). |
|
|
|
Queste proteine di membrana si legano alla proteina |
|
|
|
\textit{Zona occludens 1}, ZO-1 che, come mostrato da |
|
|
|
recenti studi \cite{??}, potrebbe modulare la formazione |
|
|
|
delle giunzioni e occuparsi della trasduzione di segnali |
|
|
|
meccanici. |
|
|
|
Inoltre vi sono evidenze sul ruolo di una terza proteina, |
|
|
|
la \textit{cingulina}, nel modulare l'interazione di ZO-1 |
|
|
|
con il citoscheletro di actina. Un'ipotesi è che il |
|
|
|
legame cingulina-ZO-1 possa indurre delle modifiche |
|
|
|
conformazionali in ZO-1 tali da consentire un legame |
|
|
|
diretto con in filamenti di actina. |
|
|
|
Anche in questo caso, per comprendere il ruolo della cingulina |
|
|
|
nella trasduzione dei segnali meccanici, sembra promettente |
|
|
|
utilizzare una tecnica che consenta, durante l'osservazione |
|
|
|
dell'interazione di due proteine sottoposte a stress |
|
|
|
meccanici, di osservare l'eventuale attaccamento al complesso |
|
|
|
di una terza proteina. Ad esempio sarebbe possibile ipotizzare |
|
|
|
un esperimento in cui allo studio dell'effetto delle sollecitazioni |
|
|
|
meccaniche sul legame actina-ZO-1 viene aggiunta l'osservazione |
|
|
|
dell'attività della cingulina attraverso microscopia di fluorescenza. |
|
|
|
Diverse proteine attraversano la membrana e dimerizzano con le loro |
|
|
|
omologhe appartenenti alla cellula adiacente, tra le quali |
|
|
|
\emph{claudina}, \emph{occludina} e diverse proteine appartenenti |
|
|
|
alla classe delle \textit{junctional adhesion molecules}, (JAM). |
|
|
|
Queste proteine di membrana si legano alla proteina \textit{Zona |
|
|
|
occludens 1}, ZO-1 che, come mostrato da recenti studi \cite{??}, |
|
|
|
potrebbe modulare la formazione delle giunzioni e occuparsi della |
|
|
|
trasduzione di segnali meccanici. |
|
|
|
Inoltre vi sono evidenze sul ruolo di una terza proteina, la |
|
|
|
\textit{cingulina}, nel modulare l'interazione di ZO-1 con il |
|
|
|
citoscheletro di actina. Un'ipotesi è che il legame cingulina-ZO-1 |
|
|
|
possa indurre delle modifiche conformazionali in ZO-1 tali da |
|
|
|
consentire un legame diretto con in filamenti di actina. |
|
|
|
Anche in questo caso, per comprendere il ruolo della cingulina nella |
|
|
|
trasduzione dei segnali meccanici, sembra promettente utilizzare una |
|
|
|
tecnica che consenta, durante l'osservazione dell'interazione di due |
|
|
|
proteine sottoposte a stress meccanici, di osservare l'eventuale |
|
|
|
attaccamento al complesso di una terza proteina. Ad esempio sarebbe |
|
|
|
possibile ipotizzare un esperimento in cui allo studio dell'effetto |
|
|
|
delle sollecitazioni meccaniche sul legame actina-ZO-1 viene aggiunta |
|
|
|
l'osservazione dell'attività della cingulina attraverso microscopia |
|
|
|
di fluorescenza. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
\section{Manipolazione ottica di molecole biologiche} |
|
|
|
\label{sec:ot} |
|
|
|
|
|
|
|
Le pinzette ottiche (o \textit{optical tweezers}, OT) sono strumenti |
|
|
|
Le pinzette ottiche (o \textit{optical tweezer}, OT) sono strumenti |
|
|
|
che sfruttano la \emph{forza di radiazione} esercitata da un fascio |
|
|
|
laser gaussiano altamente focalizzato su materiali dielettrici, in |
|
|
|
modo da intrappolare e manipolare oggetti microscopici con una |
|
|
@ -344,12 +341,12 @@ intendiamo studiare. |
|
|
|
Tipicamente esperimenti di questo tipo vengono realizzati utilizzando |
|
|
|
sfere dielettriche di dimensioni micrometriche funzionalizzate legando |
|
|
|
covalentemente molecole di \textit{streptavidina} alla loro |
|
|
|
superificie. |
|
|
|
superficie. |
|
|
|
|
|
|
|
In questo modo è possibile successivamente ottenere il legame delle |
|
|
|
microsfere col polimero biologico d'interesse, purché esso sia stato |
|
|
|
preventivamente biotilinato. Si sfrutta in questo modo il legame |
|
|
|
streptavidina-biotina, estremamente stabile e praticamente |
|
|
|
preventivamente legato a molecole di biotina (biotilinato). |
|
|
|
Si sfrutta in questo modo il legame streptavidina-biotina, estremamente stabile e praticamente |
|
|
|
irreversibile (vedi figura \ref{fig:biotin-streptavidin}). |
|
|
|
|
|
|
|
\begin{figure}[ht] |
|
|
|