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@@ -557,6 +557,60 @@ proteine contenenti regioni fluorescenti.
 I fluorofori utilizzati possono essere piccole molecole organiche,
 nanoparticelle realizzate in materiali semiconduttori (come i punti
 quantici) oppure sequenze di amminoacidi.
-
-Per la produzione delle immagini esistono due macrocategorie di
-tecniche:
+In commercio si trovano numerosi fluorofori operanti in molteplici
+regioni dello spettro visibile e con protocolli di marcatura
+standardizzati. La scelta del fluoroforo e del protocollo di marcatura
+devono tener conto di numerosi fattori, tra i quali: le condizioni
+dell'esperimento (in vivo o in vitro), le possibili interferenze col
+comportamento del sistema studiato, la compatibilità con le sostanza
+chimiche usate in soluzione, la stabilità del fluoroforo stesso e il 
+suo tempo di vita.
+
+Per la produzione delle immagini esistono due macro-categorie di
+tecniche: le microscopie a campo largo (o \textit{wide-field}) e
+le miscroscopie a scansione puntiforme.
+Nel primo caso l'intero volume osservato viene illuminato
+uniformemente e la radiazione emessa per fluorescenza viene raccolta
+e ingrandita da un opportuno cammino ottico che ricostruisce
+l'immagine sulla matrice di un sensore CMOS o CCD.
+Nel secondo caso l'area di interesse viene suddivisa in un reticolo
+tridimensionale di punti e ogni punto viene acquisito sequenzialmente,
+illuminando il più piccolo volume circostante possibile e raccogliendo
+tutta la radiazione emessa proveniente dal medesimo volume in un
+unico punto, coincidente con l'apertura di un fotodiodo o di un
+fotomoltiplicatore.
+
+Il principale vantaggio delle tecniche a scansione rispetto a quelle
+a campo largo risiede in una più marcata soppressione del
+rumore di fondo dovuto all'emissione di fluorescenza fuori dal
+piano focale. I microscopi che sfruttano queste tecniche sono infatti
+equipaggiati di opportuni accorgimenti per filtrare sia la radiazione
+di eccitazione che quella raccolta in modo da selezionare uno strato
+estremamente sottile del volume del campione.
+Le dimensioni del volume selezionato per ogni
+punto acquisito posso avvicinarsi molto al limite di diffrazione, e
+in questo modo è possibile visualizzare in maniera estremamente nitida
+strutture con dettagli di dimensioni confrontabili con il limite
+di diffrazione,
+Lo svantaggio principale invece sta nella massima risoluzione
+temporale ottenibile: per acquisire un'immagine è necessario
+muovere il campione (o il fascio di illuminazione) attraverso
+l'intero reticolo e per ogni punto è necessario un tempo di sosta
+adeguato a raccogliere un numero sufficiente di fotoni.
+La risoluzione temporale di un microscopio a scansione quindi,
+decresce all'aumentare delle dimensioni dell'area osservata e della
+densità di punti acquisita.
+
+La microscopia a campo largo, acquisendo simultaneamente tutto il
+fotogramma in una sola volta, consente di raggiungere risoluzioni
+temporali molto elevate anche per campioni estesi. La velocità
+di acquisizione di un singolo fotogramma è essenzialmente limitata
+dalla sensibilità del sensore usato e dalla velocità della sua scheda
+elettronica.
+Tuttavia, in questo caso, sul sensore si va a sommare all'immagine
+proveniente dai fluorofori nel piano focale quella, fuori fuoco,
+di tutti gli emettitori che si trovino su piani diversi attraversati
+dal fascio.
+In campioni con una elevata densità di fluorofori liberi in soluzione
+questo effetto viene particolarmente accentuato, con un effetto
+negativo sul rapporto segnale/rumore ottenibile.