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@ -572,6 +572,36 @@ della regione illuminata è ridotta al \SI{17}{\percent} (figura \ref{fig:flatfi |
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\label{fig:flatfield} |
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\end{figure} |
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La densità di potenza che si riesce ad ottenere sul campione risulta intorno ai |
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\SI{100}{\W\per\square\cm}. |
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Per poter rilevare e localizzare singoli fluorofori è necessario ottenere |
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un rapporto segnale/rumore molto elevato. |
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I fotoni emessi da una singola molecola sono relativamente pochi e tutte |
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le sorgenti di fotoni spuri che potrebbero raggiungere il rilevatore |
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devono essere soppresse nel miglior modo possibile. |
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I componenti ottici usati nell'apparato, le strutture di sostegno |
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del microscopio, i vetrini usati per preparare i campione e i solventi usati |
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possono essere deboli sorgenti di fluorescenza ed emettere fotoni |
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alle stesse lunghezze d'onda raccolte. |
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Per questo motivo è di particolare importanza isolare spazialmente i diversi |
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cammini ottici nell'apparato, minimizzare la diffusione della luce riducendo |
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il diametro dei fasci a quello necessario, prestando particolare cura al |
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perfetto allineamento e centraggio di ogni componente e inserendo elementi |
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assorbenti di separazione quando possibile. |
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Lo spettro di emissione del laser utilizzato per il fascio di eccitazione |
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deve essere il più pulito possibile, infatti eventuali componenti residue |
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vicine alla finestra di emissione del fluoroforo possono portare a un aumento |
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della luce retrodiffusa dal campione nel cammino di raccolta, aumentando |
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significativamente il rumore all'aumentare della potenza del laser. |
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Per questo motivo, visto che le sorgenti che abbiamo a disposizione |
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sono economici |
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\section{TIRF e illuminazione a modi di galleria} |
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\label{sec:gallery_mode} |
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