|
|
@ -2,7 +2,50 @@ |
|
|
|
\chapter{Apparato sperimentale} |
|
|
|
\label{cap:methods} |
|
|
|
|
|
|
|
L'apparato sperimentale consiste in un microscopio inverito, montato |
|
|
|
L'apparato sperimentale realizzato consiste in un microscopio |
|
|
|
invertito, progettato con la collaborazione dell'Officina Meccanica |
|
|
|
del LENS, che combina l'illuminazione a luce trasmessa con un sistema |
|
|
|
di due pinzette ottiche posizionabili elettronicamente e con uno |
|
|
|
schema di microscopia di epifluorescenza, in grado di raggiungere |
|
|
|
la sensibilità di singola molecola e di alternare diversi schemi |
|
|
|
di illuminazione (campo largo, TIRF, HILO). |
|
|
|
|
|
|
|
Una rappresentazione schematica del microscopio è mostrata in figura |
|
|
|
\ref{fig:microscope}. |
|
|
|
|
|
|
|
Il sistema è ottimizzato per consentire la coesistenza e il |
|
|
|
funzionamento simultaneo - senza interferenze - dei tre principali |
|
|
|
schemi di microscopia e manipolazione: |
|
|
|
|
|
|
|
\begin{description} |
|
|
|
\item[Illuminazione a luce trasmessa:] la luce emessa da una |
|
|
|
sorgente LED a spettro largo viene collimata da un |
|
|
|
condensatore e trasmessa dall'alto verso il basso attraverso |
|
|
|
il campione. |
|
|
|
L'obiettivo posto sotto il campione raccoglie la luce |
|
|
|
trasmessa ricostruisce un'immagine ingrandita del |
|
|
|
contrasto di densità dello stesso. |
|
|
|
\item[Pinzette ottiche:] due intensi fasci laser vengono |
|
|
|
collimati sul piano focale posteriore dell'obiettivo, |
|
|
|
quindi focalizzati sul campione. In questo modo possono |
|
|
|
essere usati per intrappolare e manipolare microsfere |
|
|
|
in soluzione. La radiazione laser diffusa che attraversa |
|
|
|
il campione e viene raccolta dal condensatore può essere |
|
|
|
analizzata per monitorare lo stato delle trappole e lo |
|
|
|
spostamento dal centro delle sfere intrappolate. |
|
|
|
\item[Epifluorescenza:] Un fascio laser di eccitazione viene |
|
|
|
focalizzato sul piano focale posteriore dell'obiettivo, e |
|
|
|
quindi trasmesso collimato attraverso il campione. La |
|
|
|
radiazione di fluorescenza emessa all'indietro dal campione |
|
|
|
viene nuovamente raccolta dall'obiettivo e attraverso |
|
|
|
un opportuno specchio dicroico disaccoppiata dal fascio |
|
|
|
di eccitazione. |
|
|
|
\end{description} |
|
|
|
|
|
|
|
Per evitare interferenze tra i tre schemi è stato necessario |
|
|
|
scegliere oppurtune lunghezze d'onda per la radiazione di |
|
|
|
illuminazione e, di conseguenza, appropriati specchi dicroici |
|
|
|
e filtri. |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
\section{Force-clamp} |
|
|
|