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\chapter{Apparato sperimentale} |
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\chapter{Apparato sperimentale} |
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\label{cap:methods} |
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\label{cap:methods} |
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L'apparato sperimentale consiste in un microscopio inverito, montato |
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L'apparato sperimentale realizzato consiste in un microscopio |
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invertito, progettato con la collaborazione dell'Officina Meccanica |
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del LENS, che combina l'illuminazione a luce trasmessa con un sistema |
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di due pinzette ottiche posizionabili elettronicamente e con uno |
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schema di microscopia di epifluorescenza, in grado di raggiungere |
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la sensibilità di singola molecola e di alternare diversi schemi |
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di illuminazione (campo largo, TIRF, HILO). |
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Una rappresentazione schematica del microscopio è mostrata in figura |
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\ref{fig:microscope}. |
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Il sistema è ottimizzato per consentire la coesistenza e il |
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funzionamento simultaneo - senza interferenze - dei tre principali |
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schemi di microscopia e manipolazione: |
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\begin{description} |
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\item[Illuminazione a luce trasmessa:] la luce emessa da una |
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sorgente LED a spettro largo viene collimata da un |
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condensatore e trasmessa dall'alto verso il basso attraverso |
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il campione. |
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L'obiettivo posto sotto il campione raccoglie la luce |
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trasmessa ricostruisce un'immagine ingrandita del |
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contrasto di densità dello stesso. |
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\item[Pinzette ottiche:] due intensi fasci laser vengono |
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collimati sul piano focale posteriore dell'obiettivo, |
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quindi focalizzati sul campione. In questo modo possono |
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essere usati per intrappolare e manipolare microsfere |
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in soluzione. La radiazione laser diffusa che attraversa |
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il campione e viene raccolta dal condensatore può essere |
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analizzata per monitorare lo stato delle trappole e lo |
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spostamento dal centro delle sfere intrappolate. |
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\item[Epifluorescenza:] Un fascio laser di eccitazione viene |
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focalizzato sul piano focale posteriore dell'obiettivo, e |
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quindi trasmesso collimato attraverso il campione. La |
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radiazione di fluorescenza emessa all'indietro dal campione |
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viene nuovamente raccolta dall'obiettivo e attraverso |
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un opportuno specchio dicroico disaccoppiata dal fascio |
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di eccitazione. |
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\end{description} |
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Per evitare interferenze tra i tre schemi è stato necessario |
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scegliere oppurtune lunghezze d'onda per la radiazione di |
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illuminazione e, di conseguenza, appropriati specchi dicroici |
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e filtri. |
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\section{Force-clamp} |
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\section{Force-clamp} |
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