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\chapter{Apparato sperimentale} \chapter{Apparato sperimentale}
\label{cap:methods} \label{cap:methods}
L'apparato sperimentale consiste in un microscopio inverito, montato
L'apparato sperimentale realizzato consiste in un microscopio
invertito, progettato con la collaborazione dell'Officina Meccanica
del LENS, che combina l'illuminazione a luce trasmessa con un sistema
di due pinzette ottiche posizionabili elettronicamente e con uno
schema di microscopia di epifluorescenza, in grado di raggiungere
la sensibilità di singola molecola e di alternare diversi schemi
di illuminazione (campo largo, TIRF, HILO).
Una rappresentazione schematica del microscopio è mostrata in figura
\ref{fig:microscope}.
Il sistema è ottimizzato per consentire la coesistenza e il
funzionamento simultaneo - senza interferenze - dei tre principali
schemi di microscopia e manipolazione:
\begin{description}
\item[Illuminazione a luce trasmessa:] la luce emessa da una
sorgente LED a spettro largo viene collimata da un
condensatore e trasmessa dall'alto verso il basso attraverso
il campione.
L'obiettivo posto sotto il campione raccoglie la luce
trasmessa ricostruisce un'immagine ingrandita del
contrasto di densità dello stesso.
\item[Pinzette ottiche:] due intensi fasci laser vengono
collimati sul piano focale posteriore dell'obiettivo,
quindi focalizzati sul campione. In questo modo possono
essere usati per intrappolare e manipolare microsfere
in soluzione. La radiazione laser diffusa che attraversa
il campione e viene raccolta dal condensatore può essere
analizzata per monitorare lo stato delle trappole e lo
spostamento dal centro delle sfere intrappolate.
\item[Epifluorescenza:] Un fascio laser di eccitazione viene
focalizzato sul piano focale posteriore dell'obiettivo, e
quindi trasmesso collimato attraverso il campione. La
radiazione di fluorescenza emessa all'indietro dal campione
viene nuovamente raccolta dall'obiettivo e attraverso
un opportuno specchio dicroico disaccoppiata dal fascio
di eccitazione.
\end{description}
Per evitare interferenze tra i tre schemi è stato necessario
scegliere oppurtune lunghezze d'onda per la radiazione di
illuminazione e, di conseguenza, appropriati specchi dicroici
e filtri.
\section{Force-clamp} \section{Force-clamp}


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