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@@ -595,10 +595,53 @@ vicine alla finestra di emissione del fluoroforo possono portare a un aumento
 della luce retrodiffusa dal campione nel cammino di raccolta, aumentando
 significativamente il rumore all'aumentare della potenza del laser.
 Per questo motivo, visto che le sorgenti che abbiamo a disposizione
-sono economici 
-
-
+sono economici laser a diodo con spettri di emissione non particolarmente
+\textit{puliti}, è necessario utilizzare dei filtri di \textit{clean-up}
+in modo da sopprimere con fattori di estinzione elevati ogni emissione spuria.
+
+Ugualmente importante è massimizzare l'efficienza di raccolta:
+il rilevatore utilizzato, un sensore EMCCD, può operare in regime di
+\textit{conteggio fotoni}, con una sensibilità molto elevata anche a
+brevi tempi di integrazione.
+Infatti, a differenza di quanto avviene nei comuni sensori CCD,
+gli elettroni accumulati in ciascuna cella del sensore attraversano una
+regione di moltiplicazione, dove, grazie a un'elevata differenza di
+potenziale, viene massimizzata la possibilità di generare nuovi elettroni
+per ionizzazione da impatto. Il segnale (sotto forma di cariche accumulate)
+che a questo punto viene trasferito allo stadio di integrazione e lettura
+del CCD, presentà già un elevato guadagno senza dover far ricorso a
+ulteriori stadi di amplificazione elettronica.
+Per operare correttamente il sensore EMCCD deve essere raffreddato
+a temperature $< \SI{-60}{\Celsius}$, in modo da ridurre il più
+possibile gli elettroni prodotti termicamente (corrente di buio),
+che possono subire lo stesso processo di moltiplicazione dei 
+fotoelettroni.
+
+Oltre al rumore dovuto all'apparato sperimentale è importante tenere conto
+del fatto che, quando si usa il classico schema di illuminazione a campo
+largo, il fascio di eccitazione attraversa per intero il campione.
+Quindi la presenza di fluorofori liberi in soluzione provoca un aumento
+consistente del rumore dovuto alla fluorescenza fuori fuoco.
+
+I fluorofori che si intende utilizzare per lo studio della
+meccanotrasduzione appartegono alla famiglia Alexa Fluor (Molecular Probes).
+Si tratta di molecole organiche sintentica particolarmente fotostabili
+e con resa quantica elevata.
+In commercio si trovano versioni funzionalizzate legate a svariate molecole
+e kit di coniugazione che consentono di legare semplicemente e rapidamente
+i fluorofori a proteine e peptidi.
+Tenendo conto delle caratteristiche dell'apparato è possibile utilizzare
+i fluorofori Alexa Fluor 647, 532 e 488. In figura \ref{fig:alexa_spectra}
+si riportano gli spettri di eccitazione e emissione.
 
+\begin{figure}
+    \centering
+    \includegraphics[width=0.8\linewidth]{images/alexa.png}
+    \caption{Spettri di eccitazione (linea tratteggiata) ed emissione 
+    (linea continua) dei fluorofori Alexa Fluor
+    488, 532 e 635.}
+    \label{fig:alexa_spectra}
+\end{figure}