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\chapter{Protocolli} |
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\chapter{Protocolli} |
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\label{app:protocols} |
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\label{app:protocols} |
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\begin{algorithm}[h] |
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\caption{Microsfere di silice in nitrocellulosa} |
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\label{proto:silica_beads} |
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\begin{tabular}{p{2cm} p{12cm}} |
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\textbf{Materiale \mbox{necessario}:} |
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& |
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$\bullet$~Foglio di nitrocellulosa |
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$\bullet$~Microsfere in silice (diametro \SI{1.54}{\um}, |
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10\% fraz. solida) |
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$\bullet$~Acetato di pentile |
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$\bullet$~Provette |
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$\bullet$~Centrifuga da banco |
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$\bullet$~Acetone |
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\end{tabular} |
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\begin{algorithmic}[1] |
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\STATE Preparare \SI{1}{\mL} di soluzione alla concentrazione di $0.1\%$ di |
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nitrocellulosa dissolta in acetato di pentile. |
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\STATE Diluire \SI{20}{\uL} di microsfere in silice in \SI{1}{\mL} di |
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acetone, sonicare per \SI{30}{\second} e vortexare. |
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\STATE Centrifugare per \SI{2}{\minute} a \SI{19000}{g}. |
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\STATE Ripetere il lavaggio precedente |
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\STATE Ripetere il lavaggio precedente due volte risospendendo nella |
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soluzione di nitrocellulosa in acetato di pentile. |
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\STATE Conservare a \SI{4}{\celsius} e usare entro un mese. |
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\end{algorithmic} |
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\end{algorithm} |
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\begin{algorithm}[h] |
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\begin{algorithm}[h] |
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\caption{Cella di flusso con microsfere in silice |
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\caption{Cella di flusso con microsfere in silice |
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immobilizzate} |
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immobilizzate} |
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\label{proto:silica_beads_flow_cell} |
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\label{proto:silica_beads_flow_cell} |
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\begin{tabular}{p{2cm} p{12cm}} |
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\textbf{Materiale \mbox{necessario}:} |
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& |
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$\bullet$~Soluzione con microsfere in nitrocellulosa |
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(vedi Protocollo \ref{proto:silica_beads}) |
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$\bullet$~Acqua ultrapura Milli-Q® |
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$\bullet$~Vetrino portaoggetti |
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$\bullet$~Vetrini coprioggetti \#0 (spessore \SI{100}{\um}) |
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$\bullet$~Foglio biadesivo (spessore $\approx \SI{60}{\um}$) |
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$\bullet$~Etanolo assoluto ($> 99.8\%$) |
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$\bullet$~Silicone |
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$\bullet$~Carta assorbente |
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\end{tabular} |
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\begin{algorithmic}[1] |
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\begin{algorithmic}[1] |
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\STATE sfasdf |
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\STATE fdasf |
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\STATE Pulire accuratamente un vetrino portaoggetti e due vetrini |
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coprioggetti, risciacquandoli con etanolo su entrambi i lati. |
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\STATE Far evaporare completamente il solvente. |
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\STATE Ritagliare delle strisce sottili e lunghe (circa |
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\SIlist{2x50}{\mm}) di foglio biadesivo. |
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\STATE Preparare le celle di flusso sul vetrino coprioggetti utilizzando |
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le striscette adesive (come in figura), lasciando la pellicola |
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protettiva superiore. |
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\STATE Sonicare per \SIrange{1}{2}{\minute} minuti la soluzione |
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contenente microsfere |
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e nitrocellulosa, in modo da eliminare eventuali aggregati. |
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\STATE Vortexare per \SIrange{20}{30}{\second}, in modo da sospendere |
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omogenemaente le microsfere nel volume della soluzione. |
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\STATE Prelevare con una micropipetta \SIrange{1}{2}{\uL} di soluzione. |
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\STATE Depositare la soluzione sopra un vetrino coprioggetti, tenendolo |
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fermo con la punta della pipetta e utilizzando un secondo vetrino per |
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stendere uniformemente la soluzione, poi lasciare riposare \SI{5}{\minute}. |
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\STATE Rimuovere le pellicole protettive dagli adesivi sul vetrino |
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coprioggetti, creare le celle di flusso chiudendo il vetrino |
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coprioggetti sul vetrino portaoggetti, assicurandosi che la superficie |
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rivestita con la soluzione rimanga interna alla cella. |
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\STATE Immettere acqua ultrapura, utilizzando una micropipetta, da un lato |
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della cella di flusso, fino a riempirla completamente. Utilizzare se |
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necessario un pezzo di carta assorbente per agevolare il flusso |
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dell'acqua attraverso la cella. |
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\STATE Sigillare i lati aperti della cella utilizzando del silicone. |
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\end{algorithmic} |
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\end{algorithmic} |
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\end{algorithm} |
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\end{algorithm} |