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@ -4,6 +4,59 @@ |
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\section{Stabilizzazione meccanica} |
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\label{sec:stabilization} |
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Nonostante l'isolamento meccanico fornito dagli |
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elastomeri e dal tavolo ottico la posizione del campione |
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rispetto al centro dell'obiettivo e la quota del piano |
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focale sono soggette a fluttuazioni e derive. |
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Gli effetti più evidenti e rilevabili sono rapide |
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oscillazioni della posizione del campione dovute a |
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vibrazioni acustiche residue e una progressive deriva |
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rispetto alla posizione fissata che diventa significativa |
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($> \SI{100}{\nm}$) per tempi di osservazione di |
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diversi minuti. |
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Per quantificare quest'effetto viene usato un apposito |
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campione in cui diverse microsfere in silice, di diametro |
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\SI{0.5}{\um}, vengono immobilizzate in uno strato di |
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nitrocellulosa depositato nella superficie interna |
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del vetrino coprioggetti. Le varie fasi per la |
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preparazione di questo campione sono descritte nei |
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particolari nell'appendice \ref{app:protocols} relativa |
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ai protocolli, alla sezione |
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\ref{sec:proto:silica_beads_flow}. |
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Le microsfere immobilizzate nel campione possono |
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essere messe a fuoco e visualizzate attraverso il |
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sistema di microscopia a luce trasmessa. |
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Una volta selezionata e messa a fuoco una microsfera, |
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analizzando l'immagine prodotta da uno dei due sensori |
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CMOS è possibile calcolare le coordinate (in pixel) |
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del suo centroide: |
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\begin{equation} |
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(x_{cen}, y_{cen}) = |
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\frac{ |
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\sum_{(x, y)} (x, y) I(x, y) |
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}{ |
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\sum_{(x, y)} I(x, y) |
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} |
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\end{equation} |
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Per evitare di considerare altre microsfere o |
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imperfezioni sul campione si sceglie di effettuare il |
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calcolo del centroide limitando la regione dell'immagine |
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utilizzata a un rettangolo nel quale una microsfera è |
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sufficientemente isolata. |
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Ricalcolando il centroide intervalli temporali fissati |
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è possibile osservare la deriva della posizione (x, y) |
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della microsfera. Inoltre è possibile sfruttare questo |
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stesso campione per effettuare una calibrazione del |
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fattore di conversione pixel/nm lungo due assi |
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ortogonali. |
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\section{Calibrazione parametri trappole} |
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\label{sec:calibration} |
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