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@ -503,13 +503,14 @@ seguenti effetti: |
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Grazie alla termodinamica statistica è possibile mettere in relazione |
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Grazie alla termodinamica statistica è possibile mettere in relazione |
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lo spettro delle fluttuazioni di posizione di una sfera intrappolata |
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lo spettro delle fluttuazioni di posizione di una sfera intrappolata |
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con il parametro $k$ della forza elastica di richiamo |
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con il parametro $k$ della forza elastica di richiamo |
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(vedi Appendice \ref{}). |
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(vedi Appendice \ref{app:fluctuaction_spectrum}). |
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In questo modo, una volta determinato $k$, è possibile mettere |
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In questo modo, una volta determinato $k$, è possibile mettere |
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in relazione il valore delle forze esterne agenti sulla sfera con il |
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in relazione il valore delle forze esterne agenti sulla sfera con il |
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suo spostamento dalla posizione di riposo. |
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suo spostamento dalla posizione di riposo. |
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\section{Microscopia di fluorescenza di singola molecola} |
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\section{Microscopia di fluorescenza di singola molecola} |
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\label{sec:fluo} |
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Tipicamente, le tecniche di microscopia di fluorescenza di singola |
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Tipicamente, le tecniche di microscopia di fluorescenza di singola |
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molecola consentono di sondare la posizione e i movimenti di singole |
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molecola consentono di sondare la posizione e i movimenti di singole |
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@ -613,4 +614,23 @@ di tutti gli emettitori che si trovino su piani diversi attraversati |
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dal fascio. |
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dal fascio. |
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In campioni con una elevata densità di fluorofori liberi in soluzione |
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In campioni con una elevata densità di fluorofori liberi in soluzione |
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questo effetto viene particolarmente accentuato, con un effetto |
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questo effetto viene particolarmente accentuato, con un effetto |
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negativo sul rapporto segnale/rumore ottenibile. |
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negativo sul rapporto segnale/rumore ottenibile e di conseguenza |
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sulla possibilità di individuare e localizzare singole molecole. |
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Per ottenere una sensibilità di singola molecola senza scarificare |
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la risoluzione temporale sono state sviluppate tecniche che, |
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manipolando il fascio di eccitazione, consentono di ridurre lo |
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spessore del volume di campione eccitato, come la microscopia a |
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riflessione interna totale |
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(TIRF, \textit{Total Interal Reflection Fluorescence microscopy}) |
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o quella a fogli di luce inclinati |
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(HILO, \textit{Highly Inclined and Laminated Optical sheet |
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microscopy}). |
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Grazie a queste due tecniche è possibile ottenere una sensibilità |
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di singola molecola a una risoluzione temporale nell'ordine dei |
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millisecondi, rendendo possibile ad esempio il tracciamento |
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degli spostamenti di una proteina. |
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\subsection{TIRF} |
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