You can not select more than 25 topics
Topics must start with a letter or number, can include dashes ('-') and can be up to 35 characters long.
80 lines
3.7 KiB
80 lines
3.7 KiB
\chapter{Protocolli}
|
|
\label{app:protocols}
|
|
|
|
\begin{algorithm}[ht]
|
|
\caption{Microsfere di silice in nitrocellulosa \cite{Monico2014}}
|
|
\label{proto:silica_beads}
|
|
\begin{tabular}{p{2cm} p{12cm}}
|
|
\textbf{Materiale \mbox{necessario}:}
|
|
&
|
|
$\bullet$~Foglio di nitrocellulosa
|
|
$\bullet$~Microsfere in silice (diametro \SI{1.54}{\um},
|
|
10\% fraz. solida)
|
|
$\bullet$~Acetato di pentile
|
|
$\bullet$~Provette
|
|
$\bullet$~Centrifuga da banco
|
|
$\bullet$~Acetone
|
|
\end{tabular}
|
|
\begin{algorithmic}[1]
|
|
\STATE Preparare \SI{1}{\mL} di soluzione di nitrocellulosa
|
|
dissolta in acetato di pentile, concentrazione \SI{0.1}{\percent}.
|
|
\STATE Diluire \SI{20}{\uL} di microsfere in silice in
|
|
\SI{1}{\mL} di acetone, sonicare per \SI{30}{\second} e
|
|
vortexare.
|
|
\STATE Centrifugare per \SI{2}{\minute} a \SI{19000}{g}.
|
|
\STATE Ripetere il lavaggio precedente sempre con \SI{1}{\mL} di acetone.
|
|
\STATE Ripetere il lavaggio precedente due volte con acetato di
|
|
pentile.
|
|
\STATE Risospendere infine nella soluzione di nitrocellulosa in acetato di pentile (\SI{0.1}{\percent}).
|
|
\STATE Conservare a \SI{4}{\celsius} e usare entro un mese.
|
|
\end{algorithmic}
|
|
\end{algorithm}
|
|
|
|
\begin{algorithm}[ht]
|
|
\caption{Cella di flusso con microsfere in silice
|
|
immobilizzate}
|
|
\label{proto:silica_beads_flow_cell}
|
|
\begin{tabular}{p{2cm} p{12cm}}
|
|
\textbf{Materiale \mbox{necessario}:}
|
|
&
|
|
$\bullet$~Soluzione con microsfere in nitrocellulosa
|
|
(vedi Protocollo \ref{proto:silica_beads})
|
|
$\bullet$~Acqua ultrapura Milli-Q\textsuperscript{®}
|
|
$\bullet$~Vetrino portaoggetti
|
|
$\bullet$~Vetrini coprioggetti \#0 (spessore \SI{100}{\um})
|
|
$\bullet$~Foglio biadesivo (spessore $\approx \SI{60}{\um}$)
|
|
$\bullet$~Etanolo assoluto ($> 99.8\%$)
|
|
$\bullet$~Silicone
|
|
$\bullet$~Carta assorbente
|
|
\end{tabular}
|
|
\begin{algorithmic}[1]
|
|
\STATE Pulire accuratamente un vetrino portaoggetti e due vetrini
|
|
coprioggetti, risciacquandoli con etanolo su entrambi i lati.
|
|
\STATE Far evaporare completamente il solvente.
|
|
\STATE Ritagliare delle strisce sottili e lunghe (circa
|
|
\SIlist{2x50}{\mm}) di foglio biadesivo.
|
|
\STATE Preparare le celle di flusso sul vetrino coprioggetti utilizzando
|
|
le striscette adesive (come in figura), lasciando la pellicola
|
|
protettiva superiore.
|
|
\STATE Sonicare per \SIrange{1}{2}{\minute} minuti la soluzione
|
|
contenente microsfere
|
|
e nitrocellulosa, in modo da eliminare eventuali aggregati.
|
|
\STATE Vortexare per \SIrange{20}{30}{\second}, in modo da sospendere
|
|
omogenemaente le microsfere nel volume della soluzione.
|
|
\STATE Prelevare con una micropipetta \SIrange{1}{2}{\uL} di soluzione.
|
|
\STATE Depositare la soluzione sopra un vetrino coprioggetti, tenendolo
|
|
fermo con la punta della pipetta e utilizzando un secondo vetrino per
|
|
stendere uniformemente la soluzione, poi lasciare riposare \SI{5}{\minute}.
|
|
\STATE Rimuovere le pellicole protettive dagli adesivi sul vetrino
|
|
coprioggetti, creare le celle di flusso chiudendo il vetrino
|
|
coprioggetti sul vetrino portaoggetti, assicurandosi che la superficie
|
|
rivestita con la soluzione rimanga interna alla cella.
|
|
\STATE Immettere acqua ultrapura, utilizzando una micropipetta, da un lato
|
|
della cella di flusso, fino a riempirla completamente. Utilizzare se
|
|
necessario un pezzo di carta assorbente per agevolare il flusso
|
|
dell'acqua attraverso la cella.
|
|
\STATE Sigillare i lati aperti della cella utilizzando del silicone.
|
|
|
|
|
|
\end{algorithmic}
|
|
\end{algorithm}
|