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\chapter{Metodi}
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In figura \ref{fig:setup} è mostrato uno schema integrale
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dell'apparato realizzato.
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Le componenti principali sono descritte nella sezione \ref{sec:setup}.
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Successivamente, nella sezione \ref{sec:stabilization} è descritto il
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sistema di stabilizzazione meccanica introdotto per compensare lo
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spostamento
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del campione dovuto a deriva termica e oscillazioni acustiche.
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Nella sezione \ref{sec:calibration} è descritta nel dettaglio la
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procedura usata per la calibrazione dei parametri delle trappole
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ottiche.
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L'esperimento tipico utilizzato per studiare l'interazione tra una
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proteina e un microfilamento di actina consiste in un saggio a tre
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sfere, o \textit{3-beads assay}. I dettagli per la realizzazione di
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questo esperimento sono illustrati nella sezione \ref{sec:3beads}.
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\section{Apparato sperimentale}
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\label{sec:setup}
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L'apparato sperimentale è stato realizzato presso i laboratori del
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LENS, sulla base dell'apparato utilizzato in precedenza dal di
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Biofisica di Singola Molecola per lo studio delle interazioni tra
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miosina e filamenti di actina e repressori della trascrizione
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e filamenti di DNA.
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L'apparto si compone di N parti principali:
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\begin{description}
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\item[Pinzette ottiche:] Una coppia di fasci gaussiani a \SI{1064}{\nm}, ottenuti da un laser a stato solido,
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\end{description}
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\begin{sidewaysfigure}
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\includegraphics[width=1.0\linewidth]{images/Setup.pdf}
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\caption{Caption}
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\label{fig:setup}
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\end{sidewaysfigure}
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\begin{sidewaystable}
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\centering
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\begin{tabular}{>{\tt}l l l >{\it}l l}
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\toprule
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Code & Type & Usage & Parameters & Product ID\\
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\midrule
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\multicolumn{5}{l}{\it Fluorescence Excitation Path}\\
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F-Clean635
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& Bandpass Filter
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& \SI{635}{\nm} laser clean-up
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& $\lambda_{centr}: \SI{640}{\nm},
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bw: \SI{14}{\nm}$
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& FF01-640/14-25\\
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L-TS1a
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& Plano-Convex Spherical Lens
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& Telescope for \SI{635}{\nm} laser
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& f: \SI{0}{\mm}
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& \\
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L-TS1b
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& &
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& f: \SI{0}{\mm}
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& \\
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L-TS2a
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|
&
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& Telescope for \SI{488}{\nm} laser
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& f: \SI{0}{\mm}
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|
& \\
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L-TS2b
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|
& &
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& f: \SI{0}{\mm}
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|
& \\
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DIC-532
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& Single-edge Dichroic Filter
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& Excitation beam multiplexing
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& $\lambda_{edge}: \SI{532}{\nm}$
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& Di02-R532-25-D\\
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DIC-488
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& &
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& $\lambda_{edge}: \SI{488}{\nm}$
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|
& Di02-R488-25-D\\
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L-TS3a
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& Achromatic Doublet
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& Telescope for comb. ex. lasers
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& f: \SI{0}{\mm}
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& \\
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L-TS3b
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& &
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& f: \SI{0}{\mm}
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& \\
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L-Exc
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&
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& Excitation beam focusing
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& f: \SI{0}{\mm}
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& \\
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DIC-Fluor
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& Quad-edge Dichroic Filter
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& Excitation/Emission separation
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& $\lambda_{edge}: \SIlist{405;488;532;635}{\nm}$
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& Di03-R405/488/532/635-t1 \\
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\multicolumn{5}{l}{\it Tweezers Path}\\
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L-TS4a
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& Plano-Convex Spherical Lens
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& Telescope matching isolator size
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& f: \SI{0}{\mm}
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|
& \\
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L-TS4b
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|
& &
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& f: \SI{0}{\mm}
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|
& \\
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L-TS5a
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|
& Plano-Convex Spherical Lens
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& Telescope after isolator
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& f: \SI{0}{\mm}
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|
& \\
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L-TS5b
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|
& &
|
|
& f: \SI{0}{\mm}
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|
& \\
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L-Twz1
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& Plano-Convex Spherical Lens
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& Telescope after isolator
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& f: \SI{0}{\mm}
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|
& \\
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L-Twz2
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|
& &
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& f: \SI{0}{\mm}
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|
& \\
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DIC-Twz1
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& Single-edge Dichroic Filter
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& Tweezer beam insertion
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& $\lambda_{edge}: \SI{1064}{\nm}$
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|
& \\
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\multicolumn{5}{l}{\it Imaging Path}\\
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L-Im1
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& Tube Lens
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|
& Tube Lens
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& f: \SI{0}{\mm}
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|
& \\
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L-Im2
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& Imaging Lens
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|
& Imaging Lens
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& f: \SI{0}{\mm}
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|
& \\
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DIC-BF
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& Single-edge Dichroic Filter
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& Fluorescence/Brightfield demux
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& $\lambda_{edge}: \SI{705}{\nm}$
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& FF705-Di01-25x36\\
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F-BlockBF
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& Shortpass Filter
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& Residual brightfield suppression
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& $\lambda_{cut}: \SI{700}{\nm}$
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& FESH0700\\
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F-Emiss
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& Quad-band bandpass Filter
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& Fluorophore emission filtering
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& $\lambda_{centr}: \SIlist{446;510;581;703}{\nm}$
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|
& FF01-446/510/581/703\\
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F-BlockTwz
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& Bandstop filter
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|
& Fluorophore emission filtering
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|
& $\lambda_{centr}: \SIlist{446;510;581;703}{\nm}$
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|
& FF01-446/510/581/703\\
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\end{tabular}
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\caption{Caption}
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\label{tab:my_label}
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\end{sidewaystable}
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\section{Stabilizzazione meccanica}
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\label{sec:stabilization}
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