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chapters/1-introduction.tex

@@ -33,31 +33,62 @@ modificata e modulata dalle sollecitazioni meccaniche esterne,
 permettendo alle giunzioni di comportarsi come \emph{trasduttori}
 di segnali meccanici.
 
-Per osservare e descrivere quantitativamente questi effetti di
-\emph{meccano-trasduzione} una strada molto promettente è
-rappresentata dalla manipolazione in vitro di singole molecole
-utilizzando pinzette ottiche.
+Diversi metodi sono stati proposti e realizzati sperimentalmente
+per osservare l'attività di meccano-trasduzione nei sistemi
+biologici \cite{??}, sfruttando tecniche sia \textit{in vivo} che
+\textit{in vitro}, osservando sia gli effetti macroscopici che
+le interazioni tra singole molecole.
+Nonostante ciò, per quanto riguarda le giunzioni cellulari, siamo
+ancora lontani da una descrizione soddisfacente, sia da un punto
+di vista qualitativo che quantitativo, dei meccanismi e delle
+interazioni coinvolte.
+
+Raggiungere una migliore comprensione riguardo al ruolo e al
+funzionamento della meccano-trasduzione nelle giunzioni cellulari
+rappresenta un terreno fertile e un forte stimolo per la ricerca
+di base interdisciplinare, spingendo scienziati con formazioni diverse
+ad unire le loro competenze e sviluppare tecniche complementari, in
+modo da acquisire una visione sempre più globale su fenomeni
+estremamente complessi, che coinvolgono simultaneamente processi
+meccanici, termodinamici e biochimici.
+
+Lo scopo di questo lavoro di tesi è, sviluppare, in gran parte
+\textit{ex-novo}, un apparato sperimentale per lo studio della
+meccano-trasduzione in contesti complessi come quello delle giunzioni
+cellulari, basato sulla manipolazione ottica di due proteine interagenti
+e il \textit{tracking} simultaneo, tramite microscopia di fluorescenza,
+di altre singole biomolecole nei pressi del sito di interazione.
+
+La manipolazione tramite pinzette ottiche rappresenta infatti una
+strada molto promettente per lo studio, anche quantitativo, di
+effetti meccano-biologici, grazie alla possibilità di ottenere una
+precisione di posizionamento nanometrica e di applicare alle molecole
+un ampio intervallo di forze nell'ordine dei piconewton e dei
+femtonewton.
 
 Le pinzette ottiche permettono di sondare il comportamento di
-complessi proteici sottoponendo le singole molecole a stimoli
+complessi proteici sottoponendo due molecole interagenti a stress
 meccanici controllati e andando ad osservare come la dinamica delle
 interazioni dipenda dalle forze esterne.
-La teoria alla base del loro funzionamento è
-introdotta nella sezione \ref{sec:ot}.
-
-Per indagare la dinamica delle interazioni tra due macromolecole
-(proteine ad esempio) soggette a stimoli meccanici è possibile
-eseguire esperimenti di \emph{spettroscopia di forza}, in cui si va
-ad osservare il comportamento delle molecole applicandovi forze
-di trazione o torsione dall'esterno.
-La spettroscopia di forza può essere realizzata sperimentalmente
-con diverse tecniche, tra le quali la microscopia a forza atomica e
-le pinzette ottiche.
-
-Quando la dinamica delle interazioni studiate cambia molto
-rapidamente, come nel caso di affinità deboli o rapidi cambiamenti
-conformazionali, è necessario sviluppare metodi che abbiano tempi
-di risposta molto brevi, sotto il millisecondo.
+
+Questo tipo di esperimenti si riconduce alle \emph{spettroscopie di forza},
+che in generale vengono realizzate utilizzando diverse tecniche, come
+la microscopia a forza atomica, le onde acustiche o le pinzette ottiche.
+I brevissimi tempi di risposta ottenibili utilizzando queste ultime, inferiori
+al millisecondo, hanno fatto si che le pinzette ottiche fossero applicate
+con successo allo studio di sistemi interagenti con affinità molto deboli
+o rapide modifiche conformazionali, come i motori molecolari \cite{??}.
+
+L'apparato sperimentale descritto in questo lavoro consiste sostanzialmente
+in una ricostruzione di quello utilizzato in \cite{??} per lo studio dei motori
+molecolari per quanto riguarda la componente di spettroscopia di forza, integrato
+con un sistema di microscopia di fluorescenza che consenta di osservare
+simultaneamente la dinamica di singole molecole opp
+
+
+
+
+
 
 Un sistema con queste caratteristiche è stato sviluppato in \cite{},
 utilizzando due pinzette ottiche la cui posizione può essere