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@ -609,10 +609,10 @@ regione di moltiplicazione, dove, grazie a un'elevata differenza di |
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potenziale, viene massimizzata la possibilità di generare nuovi elettroni |
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potenziale, viene massimizzata la possibilità di generare nuovi elettroni |
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per ionizzazione da impatto. Il segnale (sotto forma di cariche accumulate) |
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per ionizzazione da impatto. Il segnale (sotto forma di cariche accumulate) |
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che a questo punto viene trasferito allo stadio di integrazione e lettura |
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che a questo punto viene trasferito allo stadio di integrazione e lettura |
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del CCD, presentà già un elevato guadagno senza dover far ricorso a |
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del CCD, presenta già un elevato guadagno senza dover far ricorso a |
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ulteriori stadi di amplificazione elettronica. |
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ulteriori stadi di amplificazione elettronica. |
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Per operare correttamente il sensore EMCCD deve essere raffreddato |
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Per operare correttamente il sensore EMCCD deve essere raffreddato |
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a temperature $< \SI{-60}{\Celsius}$, in modo da ridurre il più |
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a temperature $< \SI{-60}{\celsius}$, in modo da ridurre il più |
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possibile gli elettroni prodotti termicamente (corrente di buio), |
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possibile gli elettroni prodotti termicamente (corrente di buio), |
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che possono subire lo stesso processo di moltiplicazione dei |
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che possono subire lo stesso processo di moltiplicazione dei |
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fotoelettroni. |
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fotoelettroni. |
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@ -624,8 +624,8 @@ Quindi la presenza di fluorofori liberi in soluzione provoca un aumento |
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consistente del rumore dovuto alla fluorescenza fuori fuoco. |
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consistente del rumore dovuto alla fluorescenza fuori fuoco. |
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I fluorofori che si intende utilizzare per lo studio della |
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I fluorofori che si intende utilizzare per lo studio della |
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meccanotrasduzione appartegono alla famiglia Alexa Fluor (Molecular Probes). |
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Si tratta di molecole organiche sintentica particolarmente fotostabili |
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meccanotrasduzione appartengono alla famiglia Alexa Fluor (Molecular Probes). |
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Si tratta di molecole organiche sintetica particolarmente fotostabili |
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e con resa quantica elevata. |
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e con resa quantica elevata. |
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In commercio si trovano versioni funzionalizzate legate a svariate molecole |
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In commercio si trovano versioni funzionalizzate legate a svariate molecole |
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e kit di coniugazione che consentono di legare semplicemente e rapidamente |
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e kit di coniugazione che consentono di legare semplicemente e rapidamente |
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@ -634,7 +634,7 @@ Tenendo conto delle caratteristiche dell'apparato è possibile utilizzare |
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i fluorofori Alexa Fluor 647, 532 e 488. In figura \ref{fig:alexa_spectra} |
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i fluorofori Alexa Fluor 647, 532 e 488. In figura \ref{fig:alexa_spectra} |
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si riportano gli spettri di eccitazione e emissione. |
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si riportano gli spettri di eccitazione e emissione. |
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\begin{figure} |
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\begin{figure}[ht] |
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\centering |
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\centering |
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\includegraphics[width=0.8\linewidth]{images/alexa.png} |
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\includegraphics[width=0.8\linewidth]{images/alexa.png} |
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\caption{Spettri di eccitazione (linea tratteggiata) ed emissione |
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\caption{Spettri di eccitazione (linea tratteggiata) ed emissione |
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@ -643,8 +643,19 @@ si riportano gli spettri di eccitazione e emissione. |
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\label{fig:alexa_spectra} |
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\label{fig:alexa_spectra} |
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\end{figure} |
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\end{figure} |
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Per testare la capacità di visualizzare singoli fluorofori e stimare le |
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prestazioni del sistema utilizziamo dei campioni in cui una distribuzione |
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di Alexa 647 è immobilizzata sul vetrino coprioggetti (vedi appendice |
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\ref{app:protocols}, protocollo \ref{proto:alexa}). |
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\begin{figure}[ht] |
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\centering |
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\includegraphics{images/alexa647.png} |
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\caption{Caption} |
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\label{fig:my_label} |
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\end{figure} |
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\section{TIRF e illuminazione a modi di galleria} |
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\section{TIRF e illuminazione a modi di galleria} |
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\label{sec:gallery_mode} |
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\label{sec:gallery_mode} |
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